A549 （人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)施和設(shè)備

　　A549 （人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）細(xì)胞培養(yǎng)的常用設(shè)施設(shè)備：實(shí)驗(yàn)室設(shè)計：細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須不受微生物污染和其他有害因素影響。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素，工作環(huán)境要清潔，空氣要新鮮、干燥、無煙、無塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是：無菌操作區(qū)位于房間的內(nèi)側(cè)，活動較少，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)在一個房間，而洗滌和消毒在另一個房間。
 

　　

　　A549 （人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)施和設(shè)備。

　　

　　1、超凈工作臺：又稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和外流式三類。

　　

　　2、無菌操作間：一般由換藥室、緩沖室和操作室組成。操作室配有凈化工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、倒置顯微鏡等。緩沖室可放置冰箱、冷藏箱、HAO消毒用的無菌物品等。

　　

　　3、操作室：普通孵化器、離心機(jī)、水浴鍋、計時鐘、普通天平及日常分析處理材料。

　　

　　4、清洗消毒室：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器、酸罐等。

　　

　　5、分析室：顯微鏡、電腦、打印機(jī)等。

　　

　　A549 （人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）細(xì)胞低溫保存的注意事項(xiàng)：細(xì)胞低溫保存液要提前準(zhǔn)備好，DMSO不能直接加入細(xì)胞懸液中；不同細(xì)胞的消化時間不同。以實(shí)際顯微鏡檢查結(jié)果為準(zhǔn)。當(dāng)大部分細(xì)胞回縮變圓，少數(shù)細(xì)胞脫落時，可停止消化。消化時間不宜過長；應(yīng)選擇80%-90%左右的匯合度。細(xì)胞應(yīng)在對數(shù)生長期時進(jìn)行冷凍，以確保細(xì)胞在冷凍過程中處于良好狀態(tài)。冷凍密度可根據(jù)細(xì)胞性質(zhì)進(jìn)行調(diào)整；冷凍細(xì)胞的儲存溫度應(yīng)低于-130℃，不宜長期保持在-80℃。粘附細(xì)胞冷凍保存的操作步驟如下。從培養(yǎng)箱中取出待凍細(xì)胞；在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)并拍照；將酒精消毒后的培養(yǎng)瓶放入安全柜中；吸去多余的培養(yǎng)基，加入2~3ml（PBS緩沖液）濕潤一次；加入1ml胰蛋白酶，在37℃下消化；消化約1分鐘，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況；消化完畢后，加入3ml*培養(yǎng)基，終止。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入15ml離心管進(jìn)行離心，以1000rpm/min（約200g）離心3-5min；吸去多余液體，向細(xì)胞沉淀物中加入適量冷凍液，輕輕吸打混合；按比例分別裝入冷凍管；將HAO標(biāo)簽放入梯度冷凍箱；將冷凍箱放入-80℃，冷卻一晚，然后移入液氮保存。貼壁細(xì)胞低溫保存實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作：將15mL離心管、低溫保存管、PBS緩沖液、移液器、電動移液器等物品提前放入生物安全柜，并經(jīng)紫外線照射消毒30min；取出完整的細(xì)胞培養(yǎng)液、0。25%胰蛋白酶-0.02%EDTA、細(xì)胞凍存液等從4℃冰箱中取出，復(fù)溫至室溫備用；程序冷卻箱復(fù)溫至室溫備用。