細胞學堂 | 一文了解細胞爬片制作全過程

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根據實驗選擇合適大小的爬片。

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爬片處理，首先浸酸：5%稀鹽酸浸泡過夜（最好逐片浸入，多片同時浸入會引起多片粘連、浸洗不充分），第二天先用自來水沖洗20次，再用三蒸水沖洗2次（清除殘留酸液）。

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將爬片置于無水乙醇浸泡過夜（浸洗脂類污漬），75%乙醇長期保存備用（無需高壓滅菌）。使用時鑷子取出爬片，酒精燈烘烤，放入孔板。

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收集貼壁細胞進行計數，按照實驗需求用完-全培養基稀釋細胞至合適濃度。

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加細胞前，先在每個孔里準備放爬片的位置滴加少量培養基（目的是使爬片與培養皿靠液體的張力粘合到一起），然后輕放爬片（注意不要產生氣泡，防止加細胞懸液時爬片漂起）。整個過程注意無菌操作。

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根據實驗需求接種合適細胞量到培養器皿內。

固定液的選擇：

以多聚甲醛為例進行固定：

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準備4%多聚甲醛（PFA），于4℃冰箱中保存，使用時常溫復溫。

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在培養板中將已爬好細胞的爬片用PBS浸洗3次，每次3 min，輕輕晃動，避免將細胞沖掉。

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用4%的多聚甲醛固定爬片15 min（細胞自帶熒光時注意避光），PBS浸洗爬片3次，每次3 min。

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Triton X-100（PBS配制，濃度根據實驗調整）室溫通透20 min。

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PBS浸洗爬片3次，每次3 min。

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按實驗需求進行后續實驗。

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