細(xì)胞學(xué)堂 | 實(shí)驗(yàn)室污染應(yīng)對(duì)攻略

因此，對(duì)實(shí)驗(yàn)室污染進(jìn)行預(yù)防、排查與清除，是至關(guān)重要的。本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了一份實(shí)驗(yàn)室污染最-全應(yīng)對(duì)攻略，幫助您快速上手清除污染。

不斷完善無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度，加強(qiáng)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的管理。外來(lái)進(jìn)修人員、實(shí)習(xí)學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前要進(jìn)行培訓(xùn)和教育，掌握一定的基本理論、實(shí)驗(yàn)技能、操作規(guī)程后，在帶教老師的指導(dǎo)下方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

工作臺(tái)實(shí)驗(yàn)前紫外燈消毒30 min，實(shí)驗(yàn)后用75%的酒精擦拭臺(tái)面；實(shí)驗(yàn)廢棄物高壓蒸汽滅菌后，丟棄至醫(yī)療廢物桶；無(wú)菌室以10 mL/m²的甲醛（40%），5 g/m²濃度的高錳酸鉀定期封閉消毒^[2,3]，若采用甲醛熏蒸，甲醛氣體必須分布到房間的每個(gè)角落。也可以使用普諾賽細(xì)胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進(jìn)行定期清理。

實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿隔離衣，盡量減少頻繁出入細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室，在操作過(guò)程中動(dòng)作輕柔，避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)立即排查原因，采取有效可靠的方法清除污染源，盡可能的防止大面積污染。

細(xì)菌、真菌等廣泛存在于自然界中，屬于條件致病菌，有很強(qiáng)的繁殖能力，溫暖潮濕的環(huán)境，會(huì)大量滋生。因此，必須控制實(shí)驗(yàn)室的溫度和濕度，保持室內(nèi)干燥與清潔，阻止細(xì)菌、真菌等繁殖，切斷其傳播途徑。

實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)污染有細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)等。在不確定是否污染的情況下，可進(jìn)行排查，初步確定是否污染及污染的類型。

對(duì)懷疑污染的地方，比如操作臺(tái)、培養(yǎng)箱、顯微鏡等，用醫(yī)用滅菌級(jí)棉簽蘸取采樣液（生理鹽水）進(jìn)行采樣；對(duì)可疑培養(yǎng)試劑，吸取少量試劑進(jìn)行取樣；對(duì)懷疑有污染的細(xì)胞，吸取培養(yǎng)液上清進(jìn)行取樣。

將采集的樣本分別置于瓊脂培養(yǎng)基與DMEM培養(yǎng)基中，瓊脂培養(yǎng)基放于生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，DMEM培養(yǎng)基置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d。

觀察瓊脂培養(yǎng)基是否出現(xiàn)細(xì)菌或者真菌菌落；可選擇使用PCR法、顯色法或熒光染色法檢測(cè)是否有支原體污染；對(duì)于“黑膠蟲(chóng)"污染，目前沒(méi)有明確鑒定方法。

使用75%的酒精擦拭操作臺(tái)/儀器設(shè)備，進(jìn)行消毒。甲醛（40%）10 mL/m²，高錳酸鉀5 g/m²，熏蒸細(xì)胞培養(yǎng)室。同時(shí)也可使用普諾賽細(xì)胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進(jìn)行殺菌消毒。