細胞學堂 | 培養B16系列細胞必看知識點

本期細胞學堂為大家整理了B16系列細胞的培養方法與注意事項，B16細胞黑色素的形成原因及解決方法，幫助您快速上手開展實驗。

RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；

貼壁生長，生長迅速，能產生黑色素；

0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳代比例1:3-1:4；

推薦凍存密度1-5×10⁶cell/ml。

該細胞在體外培養有兩種培養條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養基條件不同可改變該細胞的生長狀態，使用RPMI-1640培養基可使其快速增殖，而使用DMEM培養基能誘導細胞分化成熟并合成黑色素。建議正常擴增凍存請使用RPMI-1640培養基，若需要進行分泌黑色素等后續相關實驗，可以在擴增凍存細胞后更換為DMEM培養來滿足實驗設計。

需要注意的是，B16細胞對培養基條件較為敏感，同樣是DMEM或RPMI-1640培養基，不同型號、不同廠家的產品，其具體成分的少許差異都有可能改變B16系列細胞的生長狀態。在實驗時應慎重選擇培養基，培養時最好是保持和購買細胞的廠家同一型號的培養基，以保證細胞的性狀穩定。

更換培養條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會導致黑色素大量形成，細胞培養基變黑，但若穩定培養時未更換培養基，出現培養基突然變黑的情況，有可能是以下幾個原因引起的：

如果細胞在培養過程中出現大量細胞死亡，細胞的代謝產物和細胞碎片可能會導致培養基變黑。這可能是由于細胞因狀態變差、污染或其他因素引起的。

如果培養基中出現污染（細菌、真菌、支原體、黑膠蟲等），這些微生物的生長和代謝產物可能導致培養基變黑。

為了保證B16-F10細胞的活性，通常在傳代時盡可能控制胰酶的溫度及消化時間，關注B16-F10細胞的消化狀態（顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化）。消化過度導致B16-F10細胞損傷、活性下降。尤其是在進行黑色素合成、分泌和酪氨酸酶活性等相關實驗時，更需注意胰酶的消化時間，細胞的消化狀態。

使用光線對B16-F10細胞進行輻照處理時，有兩點值得關注的地方：

（1）光照時須打開培養皿蓋，以確保光線照射在B16-F10細胞上，而非被培養皿蓋折射與吸收；

（2）輻照前，需要將培養基換成無酚紅的RPMI-1640完-全培養基。避免酚紅對光線的吸收作用，影響試驗結果。