大鼠心肌細胞培養需要注意哪些問題

　　H9c2 (2-1)大鼠心肌細胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到的細胞株；H9c2(2-1)細胞表現出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合發生得很快。
 

　　培養大鼠心肌細胞時，需要注意以下幾點：
 

　　1、鼠齡選擇：新生1～3d齡大鼠的心肌細胞在出生后3d內具有部分的增殖能力，而成年大鼠的心肌細胞則為終末分化細胞，不再具有分裂增殖能力。因此，建議選擇1～3d齡的大鼠進行原代培養以獲得更多活性心肌細胞。
 

　　2、細胞復蘇：溶解細胞過程要迅速，已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。
 

　　3、細胞凍存：推薦配比為55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO的凍存液。在凍存時，盡量吹散細胞并注意控制吹打力度。
 

　　4、細胞培養：培養條件為培養基：DMEM+10% FBS+1% P/S，推薦傳代比例為1:2～1:4，換液頻率為2～3次/周，培養箱溫度設定為37℃，5% CO2。傳代操作包括：去掉培養皿中的培養基，加入PBS進行沖洗，去上清后加入0.25%胰酶進行潤洗，去上清后放入CO2培養箱消化2～4min，加入培養基終止消化并吹打均勻。
 

　　5、注意保持細胞匯合度在30%～90%，避免細胞過度生長和分化。
 

　　6、每一步操作都要輕柔小心，以免對細胞造成損傷。
 

　　7、選用優質培養基，減少有害物質對細胞的刺激。