大鼠海馬神經元細胞培養和傳代流程

　　體外培養大鼠海馬神經元細胞細胞周期有限；建議使用與procell配套的專用生長培養基和正確的操作方法進行培養，以保證細胞處于理想培養狀態。procell實驗室分離的大鼠海馬神經元細胞采用胰蛋白酶消化、神經元特異性培養基培養、篩選結合化學試劑抑制制備。細胞總數約為5×105個細胞/瓶。

　　

　　大鼠海馬神經元細胞培養和傳代流程（請嚴格按照無菌操作）：

　　

　　1、從原培養瓶中吸出培養基，用PBS緩沖液潤濕細胞兩次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細胞（注意消化時間，一般控制在1-2min內）；

　　

　　2、在顯微鏡下觀察消化情況。當細胞邊緣收縮松散貼壁時（不建議消化到細胞漂浮），去除胰蛋白酶，加入6-8ml*培養基，輕輕吹干細胞層，盡量吹散細胞層；

　　

　　3、將部分細胞懸液轉移至新的培養皿/瓶中，加入適量的*培養基，將細胞懸液打勻，放入培養箱中培養；

　　

　　4、注意培養基pH值的變化，定期更換溶液（每周2-3次），待細胞密度達到80%后重復1次操作或冷凍保存。

　　

　　特別注意：如果使用公共實驗室接觸大鼠海馬神經元細胞培養，建議添加雙抗體培養。

　　

　　1、收到細胞后，請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基。如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%血清（原瓶培養基連續使用時間不超過72小時）；

　　

　　2、貼壁細胞在收到當天不要立即消化。請更換細胞溶液，放入培養箱中孵育至次日進行消化和繼代培養。請優先使用直徑6cm的培養皿進行繼代培養；

　　

　　3、培養瓶壁破裂、漏水，請及時拍照記錄并與實驗室聯系。